Plasmide CRISPR d'Activation (h) SENP6: sc-404246-ACT

SENP6 code une protéase spécifique de SUMO qui retire les modifications SUMO des protéines cibles, contribuant à l’homéostasie de la SUMOylation et régulant la stabilité des protéines, leur localisation et la dynamique des voies de signalisation. Par la déSUMOylation de substrats clés, SENP6 favorise l’intégrité du génome en influençant les voies de réponse aux dommages de l’ADN, l’organisation de la chromatine et la progression du cycle cellulaire. La fonction de SENP6 est également associée au contrôle de processus liés au centromère et au kinétochore, garantissant une ségrégation correcte des chromosomes. Une activité dérégulée de la voie SUMO, notamment via une expression ou une activité altérée de SENP6, est fréquemment étudiée dans le contexte de l’instabilité génomique et de phénotypes de réponse au stress pertinents pour le cancer.

SENP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SENP6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SENP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SENP6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SENP6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SENP6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SENP6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SENP6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SENP6 dans les cellules tumorales présentant une expression de SENP6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.