Plasmide CRISPR d'Activation (h) SENP5: sc-404428-ACT

Le gène humain **SENP5** code une protéase spécifique de SUMO qui catalyse la déSUMOylation ainsi que la maturation des précurseurs de SUMO, contribuant au maintien de l’homéostasie de SUMO dans des processus nucléaires et associés aux mitochondries. En inversant la conjugaison de SUMO sur des substrats clés, SENP5 influence la progression du cycle cellulaire, l’organisation du fuseau mitotique, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. L’activité de SENP5 est liée à la régulation de la stabilité des protéines et de leur localisation subcellulaire via la voie SUMO, en intersection avec la dégradation dépendante de l’ubiquitine et la signalisation associée à la chromatine. Un dérèglement de la fonction des protéases SUMO, notamment une expression ou une activité altérée de SENP5, a été associé, dans des modèles expérimentaux, à une prolifération aberrante, une instabilité génomique et des phénotypes de signalisation pertinents pour le cancer.

SENP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SENP5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SENP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SENP5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SENP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SENP5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SENP5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SENP5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SENP5 dans les cellules tumorales présentant une expression de SENP5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.