SEMA4F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422884

Übersicht

Sema4f kodiert das murine Semaphorin SEMA4F, ein transmembranöses Leitsignal, das die Zell-Zell-Kommunikation und die räumliche Organisation von Geweben mitkoordiniert. SEMA4F aktiviert Plexin-/Neuropilin-Signalwege und moduliert dadurch die Zytoskelettdynamik, das Neuritenwachstum, die Axonleitfindung sowie synapsenassoziierte Umbauprozesse über Signalwege, die auf Rho-Familien-GTPasen und eine nachgeschaltete Aktinregulation zusammenlaufen. Neben der Entwicklung und Plastizität des Nervensystems trägt die Semaphorin-Signalgebung auch zur Positionierung von Immunzellen und zu deren Migrationsverhalten in unterschiedlichen Mikroumgebungen bei. Fehlregulierte Semaphorin-Plexin-Netzwerke wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuroinflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Sema4f ein nützlicher Ansatzpunkt ist, um Programme der Leitsignalgebung und Zellmotilität in Mausmodellen zu untersuchen.

Das SEMA4F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sema4f-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sema4f-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sema4f nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEMA4F-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sema4f-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEMA4F-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sema4f-Exone abzielen, die für die SEMA4F-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sema4f-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEMA4F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEMA4F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sema4f-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEMA4F HDR-Plasmid (m) und SEMA4F HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sema4f-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sema4f-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.