SEMA4F Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422884

Panoramica

Sema4f codifica la semaforina murina SEMA4F, un segnale di guida transmembrana che contribuisce a coordinare la comunicazione cellula-cellula e l’organizzazione spaziale dei tessuti. SEMA4F attiva la segnalazione plexina/neuropilina per modulare la dinamica del citoscheletro, la crescita dei neuriti, la guida degli assoni e il rimodellamento associato alle sinapsi, attraverso vie che convergono sulle GTPasi della famiglia Rho e sulla conseguente regolazione dell’actina. Oltre allo sviluppo e alla plasticità del sistema nervoso, la segnalazione delle semaforine contribuisce al posizionamento delle cellule immunitarie e al comportamento migratorio in diversi microambienti. Reti semaforina-plexina deregolate sono state implicate in fenotipi di tipo neurosviluppativo e neuroinfiammatorio, rendendo Sema4f un nodo utile per analizzare programmi di guida e motilità in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4F (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema4f in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema4f insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema4f a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA4F.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema4f per lo studio della segnalazione di SEMA4F, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema4f critici per la funzione di SEMA4F
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema4f per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA4F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA4F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema4f. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA4F Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA4F (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema4f per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema4f definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.