SEMA4B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422881

Descripción general

Sema4b codifica la señal de guía transmembrana SEMA4B, una semaforina de clase 4 que participa en la señalización dependiente de contacto para regular la adhesión celular, la migración y la remodelación del citoesqueleto. En tejidos de ratón, SEMA4B contribuye a la guía axonal y a la organización sináptica, y se ha implicado en respuestas gliales y neuronales a señales asociadas con inflamación y lesión. La señalización de semaforinas se entrecruza con vías que controlan las GTPasas de la familia Rho y cascadas de quinasas asociadas a receptores, moldeando la motilidad direccional y el patrón tisular. Las redes de semaforinas desreguladas, incluida la señalización asociada a SEMA4B, se estudian en contextos de alteraciones del neurodesarrollo, neuroinflamación e interacciones tumor–microambiente, donde las señales de guía influyen en la invasión y el posicionamiento de células inmunitarias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA4B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema4b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema4b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema4b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA4B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema4b para la investigación de la señalización de SEMA4B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema4b críticos para la función de SEMA4B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema4b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA4B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA4B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema4b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA4B (m) y el plásmido HDR SEMA4B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema4b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema4b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.