Plasmide CRISPR d'Activation (h) secretin receptor: sc-403329-ACT

SCTR code le récepteur humain de la sécrétine, un récepteur couplé aux protéines G de classe B qui se lie à la sécrétine, une hormone peptidique gastro-intestinale, afin de réguler la sécrétion épithéliale de fluides et de bicarbonate, la fonction des canaux pancréatiques et la physiologie biliaire. Après liaison du ligand, SCTR se couple principalement à Gs pour stimuler l’adénylate cyclase, augmenter l’AMPc et activer des programmes transcriptionnels et de transport ionique dépendants de la PKA, avec, selon le contexte, une signalisation additionnelle via les voies du calcium et des MAPK. L’activité du récepteur contribue à une homéostasie digestive et métabolique coordonnée et est fréquemment étudiée dans les épithéliums sécrétoires et dans des contextes neuroendocriniens. Des altérations de la signalisation GPCR/AMPc impliquant SCTR ont été explorées dans des modèles de dysfonction pancréatique et biliaire, de troubles gastro-intestinaux et de biologie tumorale sensible aux hormones, comme mécanisme modulant la sécrétion, la prolifération et la différenciation cellulaires.

secretin receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCTR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

secretin receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCTR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCTR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de secretin receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCTR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de secretin receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie secretin receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de SCTR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.