SDS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413010

Übersicht

SUDS3 kodiert SDS3, eine zentrale Komponente des Transkriptions-Korepressorkomplexes Sin3A/HDAC, der Chromatin-Remodeling mit Histondeacetylierung koppelt. Durch die Rekrutierung von HDAC1/2 und assoziierten Faktoren trägt SDS3 zu Transkriptions-Repressionsprogrammen bei, die die Zellzyklusprogression, die Festlegung von Zelllinien (Lineage Specification) sowie Reaktionen auf Entwicklungs- und Stresssignale prägen. Die SDS3-abhängige Chromatinregulation beeinflusst die Genomstabilität und die epigenetische Homöostase und verknüpft eine veränderte Komplexzusammensetzung oder -aktivität mit aberranten Genexpressionszuständen. Eine Fehlregulation der Sin3/HDAC-vermittelten Repression und verwandter epigenetischer Signalwege wird häufig in der Krebsbiologie sowie in weiteren Zusammenhängen mit neurodevelopmentalen und differenzierungsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht.

Das SDS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SUDS3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SUDS3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SUDS3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SDS3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SUDS3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SDS3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SUDS3-Exone abzielen, die für die SDS3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SUDS3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SDS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SDS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SUDS3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SDS3 HDR-Plasmid (h) und SDS3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SUDS3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SUDS3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.