SCO2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402686

Descripción general

SCO2 codifica una metalochaperona asociada a la membrana interna mitocondrial, necesaria para la biogénesis de la citocromo c oxidasa (complejo IV) al entregar cobre a la subunidad COX2 y apoyar el ensamblaje de la cadena respiratoria. A través de su papel en la fosforilación oxidativa, SCO2 ayuda a mantener el potencial de membrana mitocondrial, la producción de ATP y la homeostasis redox, vinculándose al metabolismo energético celular y a las respuestas al estrés. La alteración de SCO2 deteriora la actividad del complejo IV y puede desplazar a las células hacia estados metabólicos modificados, afectando procesos como el manejo de especies reactivas de oxígeno y la sensibilidad a la apoptosis. Las variantes patógenas en el SCO2 humano se asocian con fenotipos graves de encefalocardiomiopatía mitocondrial y cardiomiopatía, lo que lo convierte en una diana relevante para estudiar los mecanismos de las enfermedades mitocondriales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SCO2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SCO2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SCO2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SCO2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SCO2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SCO2 para la investigación de la señalización de SCO2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SCO2 críticos para la función de SCO2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SCO2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SCO2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SCO2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SCO2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SCO2 (h) y el plásmido HDR SCO2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SCO2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SCO2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.