SCLIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406430

Descripción general

STMN3 (SCLIP) es una proteína de la familia de las estatminas enriquecida en neuronas que se une a la tubulina y modula la dinámica de los microtúbulos, apoyando el crecimiento axonal, la ramificación de neuritas y la organización sináptica. Al regular la polimerización y la estabilidad de los microtúbulos, SCLIP contribuye a procesos de remodelación del citoesqueleto que influyen en el transporte intracelular y la polaridad neuronal. La alteración en la expresión o la función de STMN3 se ha asociado con una conectividad neuronal perturbada y se ha estudiado en el contexto de mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración en los que la homeostasis de los microtúbulos está alterada. Como regulador del citoesqueleto, SCLIP es relevante para investigar vías que vinculan la dinámica de los microtúbulos con la diferenciación neuronal, la plasticidad y las respuestas al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SCLIP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STMN3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STMN3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STMN3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SCLIP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STMN3 para la investigación de la señalización de SCLIP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de STMN3 críticos para la función de SCLIP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STMN3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SCLIP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SCLIP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STMN3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SCLIP (h) y el plásmido HDR SCLIP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STMN3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STMN3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.