Plasmide CRISPR/Cas9 KO SCG10 (m2): sc-422814-KO-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- SCG10 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique SCG10, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SCG10 Antibody (2-RE19): sc-135620
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO SCG10 (m2) | sc-422814-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Stmn2 code SCG10, un membre de la famille des stathmines enrichi dans les neurones, qui se lie à la tubuline et favorise la déstabilisation des microtubules, soutenant le remodelage dynamique du cytosquelette lors de la croissance des neurites et du guidage axonal au cours du développement du système nerveux chez la souris. L’activité de SCG10 influence le comportement du cône de croissance, le trafic intracellulaire et la plasticité dépendante de l’activité en couplant des signaux en amont au renouvellement des microtubules. Une dérégulation de STMN2/SCG10 a été associée à des réponses neuronales au stress et à une altération du maintien des axones, ce qui en fait une cible pertinente pour les études sur la neurodégénérescence et la vulnérabilité des motoneurones. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de SCG10 affecte les programmes de différenciation neuronale, les phénotypes de régénération axonale et les processus synaptiques dépendants du cytosquelette.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SCG10 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stmn2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stmn2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stmn2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SCG10.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stmn2 pour l'étude de la signalisation de SCG10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Stmn2 essentiels à la fonction de SCG10
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stmn2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le SCG10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SCG10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stmn2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le SCG10 plasmide HDR (m) et le SCG10 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stmn2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stmn2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.