Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SCD Double Nickase Plasmid (h): sc-401516-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SCD Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SCD Double-Nickase-Plasmid (h) und SCD Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SCD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SCD: sc-515875
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SCD Double Nickase Plasmid (h) | sc-401516-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SCD Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401516-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Stearoyl-CoA-Desaturase (SCD) ist ein zentrales Enzym des endoplasmatischen Retikulums, das eine cis-Doppelbindung in gesättigte Fettsäureacyl-CoAs einführt und dadurch einfach ungesättigte Fettsäuren erzeugt, die die Membranfluidität, die Biogenese von Lipidtröpfchen und die Proteinacylierung unterstützen. Durch die Kontrolle des Verhältnisses von gesättigten zu einfach ungesättigten Lipiden beeinflusst SCD die de-novo-Lipogenese, das Phospholipid-Remodeling und Signalnetzwerke, die mit ER-Stress und oxidativem Stress verbunden sind. Die SCD-Aktivität ist in SREBP- und PPAR-regulierte Stoffwechselprogramme eingebunden, die Fettsäuresynthese und -speicherung koordinieren. Eine fehlregulierte SCD-Expression oder -Aktivität ist mit metabolischen Phänotypen assoziiert, die Insulinsensitivität und hepatische Lipidakkumulation betreffen, und wird häufig im Zusammenhang mit lipidabhängigem Wachstum und Stressadaptation untersucht.
SCD Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SCD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SCD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SCD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SCD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.