SCD Plasmide Double Nickase (h): sc-401516-NIC

La stearoil-CoA desaturasi (SCD) è un enzima chiave del reticolo endoplasmatico che introduce un doppio legame cis negli acil-CoA di acidi grassi saturi, generando acidi grassi monoinsaturi che favoriscono la fluidità di membrana, la biogenesi delle goccioline lipidiche e l’acilazione delle proteine. Controllando il rapporto tra lipidi saturi e monoinsaturi, SCD influenza la lipogenesi de novo, il rimodellamento dei fosfolipidi e le reti di segnalazione collegate allo stress del RE e allo stress ossidativo. L’attività di SCD si integra con programmi metabolici regolati da SREBP e PPAR che coordinano la sintesi e l’immagazzinamento degli acidi grassi. Un’espressione o un’attività di SCD deregolata è associata a fenotipi metabolici che coinvolgono la sensibilità all’insulina e l’accumulo di lipidi epatici ed è spesso studiata in contesti di crescita dipendente dai lipidi e di adattamento allo stress.

SCD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SCD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SCD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SCD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SCD interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.