Partículas Lentivirales de Activación (m) Sc1: sc-420099-LAC

El gen Sparcl1 de ratón codifica Sc1 (SPARC-like 1), una glucoproteína matricelular secretada que modula la organización de la matriz extracelular y las interacciones célula–matriz. Sc1 participa en la regulación de la adhesión celular, la migración y la remodelación tisular mediante señales extracelulares que influyen en la dinámica del citoesqueleto y el comportamiento del estroma. La expresión de Sparcl1 suele asociarse a los compartimentos vascular y estromal, y se estudia en contextos de angiogénesis, reparación de heridas y regulación del microambiente mediada por fibroblastos y endotelio. La actividad desregulada de Sparcl1/Sc1 se ha implicado en la remodelación patológica y en interacciones tumor–estroma alteradas, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del control del fenotipo celular mediado por la matriz.

Las partículas de activación lentiviral Sc1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Sparcl1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Sc1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Sparcl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Sc1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Sparcl1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.