SASH1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403567-ACT

SASH1（SAM and SH3 domain containing 1）は、受容体刺激やストレスシグナルの下流でシグナル伝達複合体の編成に関与するとされる、細胞質の足場／アダプタータンパク質をコードします。ヒト細胞では、SASH1は細胞骨格ダイナミクス、細胞接着、遊走、ならびに内皮バリア関連プロセスの制御に関与することが示唆されており、増殖制御や組織構築の維持に寄与する役割と整合的です。SASH1の発現変動や遺伝的多様性は、腫瘍生物学や血管・色素関連の表現型を含む複数の疾患文脈で報告されており、状況依存的なシグナル出力を研究する上で有用な結節点となります。これらの機能から、SASH1は細胞外シグナルを転写プログラムおよび細胞運動性へと結び付ける経路を解明するための研究標的として位置付けられます。

SASH1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SASH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SASH1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SASH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSASH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SASH1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSASH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSASH1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSASH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSASH1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。