Plásmido Doble Nickase (h) SAP 155: sc-402925-NIC

SF3B1 codifica SAP 155, un componente central esencial del subcomplejo SF3b dentro del snRNP U2 que ayuda a definir el punto de ramificación y el sitio de empalme 3′ durante el corte y empalme del pre-ARNm. A través de su papel en el ensamblaje del espliceosoma y en la selección de sitios de empalme, SAP 155 influye en la diversidad de isoformas de los transcritos y vincula el procesamiento del ARN con el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la proteostasis. La desregulación del empalme dependiente de SF3B1 se ha asociado con un uso aberrante generalizado de exones y con programas de expresión génica alterados en múltiples tipos de cáncer y neoplasias hematológicas, así como en otros trastornos en los que se ve comprometida la fidelidad del espliceosoma. Como resultado, SF3B1/SAP 155 se estudia con frecuencia para relacionar la alteración de factores de empalme con cambios posteriores en vías de señalización y con firmas de empalme en RNA-seq.

SAP 155 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SF3B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SF3B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SF3B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SF3B1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.