SAMD9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418037-ACT

SAMD9 (sterile alpha motif domain containing 9) kodiert ein zytoplasmatisches Protein, das an der Regulation der angeborenen Immunantwort und der Kontrolle der Zellproliferation beteiligt ist; beschrieben sind unter anderem Funktionen bei der Einschränkung der viralen Replikation und der Modulation interferon-stimulierter Antworten. Die Funktion von SAMD9 greift in Stressantwort-Programme und homöostatische Signalwege ein, die Zellwachstum und Überleben beeinflussen, was mit seiner vorgeschlagenen Aktivität als negativer Regulator der Proliferation übereinstimmt. Genetische Veränderungen in SAMD9 sind mit erblich bedingtem Knochenmarkversagen und Immundefizienz-Phänotypen assoziiert und werden bei pädiatrischem myelodysplastischem Syndrom wiederholt über Keimbahn- oder erworbene Varianten impliciert. Diese Zusammenhänge machen SAMD9 zu einem nützlichen Genlokus für die Untersuchung von entzündungsgekoppelter Wachstumskontrolle und Mechanismen somatischer Anpassung in hämatopoetischen Zellen.

SAMD9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SAMD9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SAMD9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SAMD9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SAMD9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SAMD9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SAMD9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SAMD9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SAMD9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SAMD9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.