Plásmido CRISPR de Activación (h) SAMD8: sc-416890-ACT

SAMD8 (dominio motivo alfa estéril que contiene 8) es una proteína de membrana asociada al retículo endoplásmico, implicada en el metabolismo de los esfingolípidos, en particular en la regulación de la interconversión entre ceramida y esfingomielina dentro de la homeostasis lipídica de las membranas. A través de su función prevista en el control de los reservorios de esfingolípidos bioactivos, SAMD8 puede influir en la función del RE, la composición de la membrana y procesos de señalización posteriores vinculados a respuestas al estrés y decisiones sobre el destino celular. El desequilibrio de esfingolípidos es una característica recurrente en la biología de enfermedades metabólicas, inflamatorias y neurodegenerativas, así como en fenotipos asociados al cáncer, lo que convierte a SAMD8 en un nodo útil para estudios mecanísticos de vías. La modulación de la expresión de SAMD8 ayuda a investigar cómo la remodelación lipídica del RE se relaciona con la señalización celular y la homeostasis de los orgánulos en sistemas celulares humanos.

SAMD8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SAMD8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SAMD8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SAMD8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SAMD8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SAMD8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SAMD8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SAMD8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SAMD8 en células tumorales con expresión de SAMD8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.