Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sam50 (m): sc-427129

Présentation

Samm50 code Sam50, une protéine essentielle en tonneau β de la membrane externe mitochondriale, qui constitue le noyau du complexe SAM (sorting and assembly machinery). Sam50 coordonne la biogenèse et l’insertion membranaire des protéines en tonneau β et interagit fonctionnellement avec les systèmes d’import des protéines mitochondriales, contribuant à l’organisation de la membrane externe et à l’homéostasie mitochondriale. En raison de son rôle dans le maintien de l’architecture mitochondriale, l’import protéique et des processus liés à la respiration, une altération de la fonction du complexe SAM est pertinente pour l’étude du dysfonctionnement mitochondrial, de la signalisation du stress et de voies associées à la neurodégénérescence et à des phénotypes de maladies métaboliques dans des systèmes modèles. Dans les cellules de souris, la perturbation de Samm50 est également utilisée pour étudier le contrôle qualité mitochondrial, notamment les interactions avec la mitophagie et la signalisation de l’apoptose intrinsèque.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sam50 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Samm50 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Samm50, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Samm50 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sam50.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Samm50 pour l'étude de la signalisation de Sam50, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Samm50 essentiels à la fonction de Sam50
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Samm50 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sam50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sam50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Samm50. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sam50 plasmide HDR (m) et le Sam50 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Samm50 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Samm50 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.