Plásmido CRISPR de Activación (h) SA-1: sc-403116-ACT

STAG1 codifica SA-1, un componente central del complejo cohesina que regula la cohesión de las cromátidas hermanas, la arquitectura de la cromatina de orden superior y la comunicación a larga distancia entre potenciadores y promotores. A través de las funciones de la cohesina en la segregación cromosómica y la reparación de roturas de doble cadena del ADN, SA-1 contribuye a la estabilidad del genoma y a la progresión del ciclo celular, interactuando con vías que controlan las respuestas al estrés replicativo y los programas transcripcionales. La actividad de STAG1 influye en la expresión génica específica de linaje al moldear dominios de asociación topológica (TAD) y facilitar el establecimiento regulado de bucles de cromatina. La desregulación de subunidades de la cohesina, incluida STAG1, se asocia con alteraciones del control transcripcional y con inestabilidad cromosómica observadas en múltiples contextos de investigación relevantes para enfermedades, incluidos el cáncer y mecanismos relacionados con las cohesinopatías.

SA-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STAG1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SA-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STAG1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STAG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SA-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STAG1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SA-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SA-1 en células tumorales con expresión de STAG1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.