Partículas Lentivirales de Activación (h) S3-12: sc-409516-LAC

PLIN4 codifica la proteína humana S3-12 de la familia de las perilipinas, una proteína de recubrimiento asociada a las gotas lipídicas, enriquecida en adipocitos y otras células almacenadoras de lípidos. S3-12 participa en la biogénesis y el remodelado de las gotas lipídicas, coordinando el almacenamiento de lípidos neutros con el acceso lipolítico y el tráfico de proteínas de las gotas lipídicas. Al influir en el manejo de lípidos y el balance energético celular, PLIN4 se estudia con frecuencia en el contexto de la adipogénesis, la homeostasis metabólica y las respuestas al estrés lipídico que se entrecruzan con la señalización de la insulina y las vías de utilización de ácidos grasos. La regulación alterada de la dinámica de las gotas lipídicas y de la función de la familia de las perilipinas se ha vinculado a fenotipos metabólicos relevantes para la resistencia a la insulina asociada a la obesidad y la biología de enfermedades cardiometabólicas relacionadas.

Las partículas de activación lentiviral S3-12 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PLIN4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral S3-12 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PLIN4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de S3-12. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PLIN4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.