Plasmide CRISPR d'Activation (h) RyR-3: sc-402031-ACT

Le gène humain **RYR3** code le récepteur à la ryanodine 3 (RyR-3), un grand canal de libération de Ca²⁺ du réticulum endoplasmique/sarcoplasmique qui amplifie les signaux calciques intracellulaires en réponse à des seconds messagers en amont. RyR-3 contribue à la dynamique du calcium à proximité du couplage excitation–contraction, à la libération de calcium induite par le calcium, ainsi qu’à des processus plus larges dépendants du Ca²⁺ tels que la sécrétion, la plasticité synaptique et des programmes transcriptionnels contrôlés par la CaMK et la signalisation calcineurine/NFAT. En modulant l’homéostasie du Ca²⁺ cytosolique et organellaire, **RYR3** influence le couplage mitochondrial, l’excitabilité membranaire et les réponses au stress. Des altérations de la gestion du calcium médiée par les récepteurs à la ryanodine ont été impliquées dans des phénotypes neurologiques et musculaires et sont étudiées dans le cadre de mécanismes de maladies arythmogènes et neurodéveloppementales, sans préjuger d’issues cliniques.

RyR-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RYR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RyR-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RYR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RYR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RyR-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RYR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RyR-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RyR-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de RYR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.