RyR-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402986

Descripción general

RYR2 codifica el receptor de rianodina 2 (RyR-2), un canal tetramérico intracelular de liberación de Ca²⁺ localizado en el retículo sarcoplásmico/endoplásmico que media el acoplamiento excitación–contracción al generar liberación de calcio inducida por calcio. La actividad de RyR-2 coordina los transitorios de Ca²⁺ que regulan la contracción de los cardiomiocitos, el metabolismo mitocondrial y las vías de señalización dependientes de Ca²⁺, incluidas las respuestas transcripcionales vinculadas a CaMKII y a calcineurina/NFAT. La función del canal está determinada por el ensamblaje de complejos macromoleculares, las modificaciones postraduccionales y la detección de Ca²⁺ luminal, integrando las señales adrenérgicas con la homeostasis intracelular de Ca²⁺. Las alteraciones genéticas y funcionales de RYR2 se asocian con síndromes de arritmia hereditaria y fenotipos relacionados con cardiomiopatía, lo que lo convierte en un nodo central para el estudio del manejo del calcio cardíaco y de la señalización sensible al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RYR2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RYR2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RYR2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RYR2 para la investigación de la señalización de RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RYR2 críticos para la función de RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RYR2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RYR2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout (h) y el plásmido HDR RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RYR2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RYR2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.