Plasmide CRISPR/Cas9 KO RYK (h): sc-402654

Présentation

RYK (récepteur tyrosine kinase de type « receptor-like ») code un récepteur transmembranaire atypique à passage unique, qui agit principalement comme corécepteur dans la signalisation WNT non canonique, notamment dans les voies dépendantes de WNT5A qui régulent la polarité cellulaire, la migration directionnelle et la dynamique du cytosquelette. Par ses interactions avec les ligands WNT et les récepteurs Frizzled, RYK peut influencer la polarité planaire des cellules et des effecteurs en aval tels que JNK, reliant des signaux extracellulaires à des programmes transcriptionnels et morphogénétiques. L’activité de RYK a été associée au développement neural et au guidage axonal, et une dérégulation de la signalisation RYK/WNT a été rapportée dans des contextes d’invasion tumorale, de phénotypes associés aux métastases et de microenvironnements inflammatoires. Ces propriétés font de RYK une cible utile pour explorer les interactions (crosstalk) entre la signalisation WNT, l’adhésion cellulaire et le comportement migratoire dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RYK (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RYK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RYK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RYK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RYK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RYK pour l'étude de la signalisation de RYK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RYK essentiels à la fonction de RYK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RYK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RYK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RYK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RYK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RYK plasmide HDR (h) et le RYK (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RYK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RYK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.