RYK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402654

概要

RYK（receptor-like tyrosine kinase）は、非典型的な単回膜貫通型受容体をコードしており、主として非正統型WNTシグナル伝達の共受容体として機能します。これには、細胞極性、方向性移動、細胞骨格ダイナミクスを制御するWNT5A駆動経路が含まれます。RYKはWNTリガンドおよびFrizzled受容体との相互作用を介して、平面内細胞極性やJNKなどの下流エフェクターに影響を及ぼし、細胞外からのシグナルを転写・形態形成プログラムへと結び付けます。RYK活性は神経発生や軸索ガイダンスに関与するとされ、RYK/WNTシグナルの破綻は、腫瘍細胞の浸潤、転移に関連する表現型、炎症性微小環境などの文脈で報告されています。これらの特性により、RYKはヒト細胞モデルにおいて、WNTシグナル、細胞接着、遊走挙動の間の経路クロストークを解析するための有用な標的となります。

RYK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRYK遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RYK内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RYKのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RYKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RYKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RYK欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RYKの機能に不可欠なRYKエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RYKゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RYK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRYK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RYK遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RYK HDRプラスミド（h）および RYK HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRYKホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRYK標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。