Partículas Lentivirales de Activación (h) Rtn-3: sc-404072-LAC

RTN3 codifica reticulón-3 (Rtn-3), una proteína de membrana del retículo endoplásmico (RE) que ayuda a dar forma a la arquitectura tubular del RE y contribuye a la dinámica del tráfico RE–Golgi. Rtn-3 está implicada en la proteostasis y en la respuesta celular a proteínas mal plegadas, lo que la vincula con la señalización de estrés del RE y con vías relacionadas que influyen en la homeostasis neuronal. En el sistema nervioso, RTN3 se ha asociado con el procesamiento de la proteína precursora del amiloide y con la biología de las neuritas, lo que respalda la investigación de los mecanismos subyacentes a fenotipos neurodegenerativos. La expresión o la localización alteradas de RTN3 también se han relacionado con alteraciones del tráfico de membranas y de la función sináptica, lo que la convierte en una diana útil para analizar la regulación de la red del RE en modelos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rtn-3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RTN3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rtn-3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RTN3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rtn-3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RTN3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.