Plasmide CRISPR/Cas9 KO RRBP1 (h): sc-410995

Présentation

RRBP1 (ribosome binding protein 1) code une protéine associée à la membrane du réticulum endoplasmique (RE) qui favorise le ciblage co‑traductionnel des polypeptides naissants vers le RE et contribue à l’organisation du RE ainsi qu’à la capacité de la voie sécrétoire. En reliant les ribosomes au RE rugueux, RRBP1 influence la synthèse, le repliement et le trafic des protéines, des processus étroitement liés à l’homéostasie du RE et à la réponse aux protéines mal repliées (unfolded protein response). Des modifications de l’expression de RRBP1 ont été rapportées dans des contextes de stress cellulaire et de remodelage prolifératif, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la protéostasie, de l’adaptation associée au RE et des réseaux de signalisation couplés à la demande sécrétoire. RRBP1 présente donc un intérêt dans des modèles examinant la sensibilité au stress du RE, la dynamique du trafic membranaire et les perturbations, associées aux maladies, de la gestion des protéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RRBP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RRBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RRBP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RRBP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RRBP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RRBP1 pour l'étude de la signalisation de RRBP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RRBP1 essentiels à la fonction de RRBP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RRBP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RRBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RRBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RRBP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RRBP1 plasmide HDR (h) et le RRBP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RRBP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RRBP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.