Plásmido CRISPR de Activación (h) RPL29: sc-403879-ACT

RPL29 codifica la proteína ribosomal L29, un componente básico de la subunidad ribosomal grande 60S que contribuye al ensamblaje del ribosoma y a la traducción eficiente de ARNm en el citoplasma. Como parte de la maquinaria central de síntesis proteica, RPL29 sostiene la proteostasis y programas de crecimiento celular que están estrechamente acoplados a la biogénesis ribosomal y al control de la traducción. La expresión alterada de proteínas ribosomales, incluida RPL29, se observa con frecuencia en condiciones con proliferación desregulada y adaptación al estrés, y puede influir en los fenotipos celulares mediante cambios en la traducción global y selectiva. Por lo tanto, RPL29 constituye un nodo útil para estudiar cómo la composición del ribosoma y la capacidad de traducción se interrelacionan con el control del ciclo celular, la reprogramación metabólica y las vías de respuesta al estrés.

RPL29 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPL29 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RPL29 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPL29 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPL29, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RPL29. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPL29 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RPL29 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RPL29 en células tumorales con expresión de RPL29 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.