RoXaN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422830

Übersicht

Zc3h7b kodiert RoXaN, ein zinkfingerhaltiges Protein, das an RNA‑Metabolismus und posttranskriptioneller Regulation beteiligt ist und dem Funktionen bei der Koordination ribonukleoproteinischer Komplexe zugeschrieben werden, die die mRNA‑Stabilität und Translation beeinflussen. Über diese Aktivitäten kann RoXaN zelluläre Programme steuern, die mit Proliferation, Stressantworten und Differenzierung verknüpft sind, indem es die Expression von Signalwegkomponenten auf Transkriptebene mitprägt. Eine veränderte Regulation von RNA‑bindenden Faktoren und Zinkfingerproteinen ist häufig mit gestörter Wachstumskontrolle sowie mit immunologischen oder neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen verbunden, was Zc3h7b zu einem geeigneten Lokus für mechanistische Studien der Genexpressionskontrolle macht. In Mausmodellen ermöglicht eine Störung von Zc3h7b die Untersuchung, wie RNA‑Regulationsnetzwerke mit Signalwegen und Zellzustandsübergängen in krankheitsrelevanten Kontexten zusammenwirken.

Das RoXaN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zc3h7b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zc3h7b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zc3h7b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RoXaN-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zc3h7b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RoXaN-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zc3h7b-Exone abzielen, die für die RoXaN-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zc3h7b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RoXaN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RoXaN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zc3h7b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RoXaN HDR-Plasmid (m) und RoXaN HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zc3h7b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zc3h7b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.