RORγ Lentiviral Activation Particles (m): sc-422700-LAC

Rorc kodiert den nukleären Rezeptor RORγ, einen ligandengesteuerten Transkriptionsfaktor, der an ROR-Response-Elemente bindet, um gewebespezifische und kontextabhängige Genexpressionsprogramme zu koordinieren. Im Immunsystem ist die Aktivität der RORγt-Isoform zentral für die Differenzierung und Aufrechterhaltung von Th17-Zellen und Innate Lymphoid Cells der Gruppe 3 (ILC3) und verknüpft Zytokinnetzwerke wie die IL-17/IL-23-Signalübertragung mit entzündlichen transkriptionellen Schaltkreisen. RORγ trägt außerdem zur Entwicklung von Thymozyten sowie über die Signalgebung nukleärer Rezeptoren zu umfassenderen, stoffwechsel- und zirkadianassoziierten Regulationswegen bei. Eine fehlregulierte Rorc/RORγ-Aktivität wurde in Modellen für Autoimmunität und chronische Entzündung beschrieben, wodurch es ein häufig genutzter Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu T‑Zell-Schicksalsentscheidungen und mukosaler Immunität ist.

RORγ Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Rorc-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

RORγ Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Rorc-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen RORγ-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Rorc-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.