Plásmido CRISPR de Activación (m) RORγ: sc-422700-ACT

Rorc codifica el receptor nuclear RORγ, un factor de transcripción regulado por ligando que se une a elementos de respuesta a ROR para coordinar programas de diferenciación inmunitaria y homeostasis tisular en el ratón. RORγ es un regulador central de la especificación del linaje Th17 y de la actividad de la red de citocinas IL‑17, integrando señales de las vías JAK/STAT impulsadas por citocinas con el remodelado de la cromatina para moldear la expresión génica inflamatoria. Además de sus funciones inmunitarias, RORγ contribuye a ritmos transcripcionales vinculados al metabolismo y al ciclo circadiano mediante interacciones con reguladores centrales del reloj y del metabolismo lipídico. La actividad desregulada de Rorc/RORγ se estudia con frecuencia en modelos de inflamación crónica y autoinmunidad, así como en contextos de inmunología tumoral en los que los programas asociados a Th17 influyen en el microambiente inmunitario.

RORγ El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rorc sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RORγ El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rorc en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rorc, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RORγ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rorc y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RORγ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RORγ en células tumorales con expresión de Rorc silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.