Rootletin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401646
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Rootletin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Rootletin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rootletin Anticuerpo (C-2): sc-374056
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Rootletin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401646 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CROCC codifica rootletina, una gran proteína citoesquelética de tipo *coiled-coil* que forma raíces ciliares asociadas al centrosoma y contribuye a la cohesión del centrosoma y a su organización estructural. La rootletina mantiene la integridad del cuerpo basal y la ciliogénesis, vinculando la arquitectura centrosomal con la organización de los microtúbulos y la progresión del ciclo celular. La alteración de CROCC puede perturbar redes de señalización dependientes de los cilios y la fidelidad mitótica, procesos que se investigan con frecuencia en estudios sobre ciliopatías, degeneración retiniana y mecanismos de enfermedades proliferativas. Como componente centrosomal humano, la rootletina también es relevante para la investigación de anomalías del centrosoma, inestabilidad cromosómica y polaridad celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rootletin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CROCC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CROCC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CROCC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rootletin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CROCC para la investigación de la señalización de Rootletin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CROCC críticos para la función de Rootletin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CROCC para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Rootletin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rootletin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CROCC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rootletin (h) y el plásmido HDR Rootletin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CROCC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CROCC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.