Plasmide Double Nickase (h) RNF43: sc-403797-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF43 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF43 Double Nickase (h) et le plasmide RNF43 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF43. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF43 | sc-403797-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF43 | sc-403797-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF43 code une ligase E3 de l’ubiquitine de type RING qui agit comme un régulateur négatif majeur de la signalisation WNT/β‑caténine en ubiquitinant les récepteurs Frizzled et en favorisant leur endocytose et leur renouvellement. Par ce contrôle au niveau des récepteurs, RNF43 contribue à ajuster le maintien des cellules souches, l’homéostasie épithéliale ainsi que des programmes, dépendants du contexte, de prolifération et de différenciation. Son activité est étroitement liée à l’axe R‑spondine/LGR et s’inscrit dans la dynamique du système ubiquitine–protéasome qui module la disponibilité des récepteurs membranaires. Une dérégulation ou des altérations entraînant une perte de fonction de RNF43 sont fréquemment étudiées en lien avec une activation aberrante de la voie WNT dans la biologie tumorale gastro-intestinale et pancréatique, ainsi que dans des modèles de transformation épithéliale.
RNF43 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF43 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF43. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF43. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF43.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.