RNF145 Double Nickase Plasmid (m): sc-428832-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RNF145 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RNF145 Double-Nickase-Plasmid (m) und RNF145 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rnf145 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RNF145 Double Nickase Plasmid (m) | sc-428832-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF145 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-428832-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Rnf145** kodiert **RNF145**, eine im ER (endoplasmatischen Retikulum) lokalisierte RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die zur Regulation der zellulären Sterol- und Lipidhomöostase beiträgt, indem sie den ubiquitinabhängigen Abbau zentraler Komponenten dieser Signalwege fördert. Die RNF145-Aktivität ist mit ER-assoziierten Mechanismen der Proteinkontrolle und Proteostase verknüpft und verbindet Ubiquitinierung mit adaptiven Antworten auf Veränderungen der Membranlipidzusammensetzung und des metabolischen Zustands. Aufgrund ihres Einflusses auf cholesterinregulatorische Netzwerke und zugehörige Transkriptionsprogramme wird **Rnf145** häufig im Kontext metabolischer Fehlregulation und lipidvermittelter Stressphänotypen untersucht. Untersuchungen von RNF145 mittels Loss-of-Function- oder Gain-of-Function-Ansätzen unterstützen mechanistische Studien zur Ubiquitin-Signalgebung, zur Biologie der ER-Membran und zu nachgeschalteten Effekten auf Wege des Lipidstoffwechsels.
RNF145 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rnf145-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rnf145 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rnf145-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rnf145-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.