Plásmido Doble Nickase (m) RNF145: sc-428832-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)RNF145 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RNF145 (m) y el plásmido de doble nickasa RNF145 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Rnf145. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) RNF145 | sc-428832-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) RNF145 | sc-428832-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Rnf145** codifica **RNF145**, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING residente en el retículo endoplásmico (RE) que ayuda a regular la homeostasis celular de esteroles y lípidos al promover el recambio dependiente de ubiquitina de componentes clave de la vía. La actividad de RNF145 se integra con los mecanismos de control de calidad proteica asociados al RE y de proteostasis, vinculando la ubiquitinación con respuestas adaptativas en la composición lipídica de membrana y el estado metabólico. Por su influencia en las redes reguladoras del colesterol y en programas transcripcionales relacionados, **Rnf145** se estudia con frecuencia en el contexto de la desregulación metabólica y de fenotipos de estrés inducidos por lípidos. El análisis de pérdida o ganancia de función de RNF145 respalda estudios mecanísticos de la señalización por ubiquitina, la biología de la membrana del RE y los efectos posteriores sobre las vías del metabolismo lipídico.
RNF145 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Rnf145 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Rnf145. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Rnf145. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Rnf145 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.