Plásmido CRISPR de Activación (h) RN-tre: sc-411321-ACT

USP6NL (RN-tre) codifica una proteína activadora de GTPasas Rab implicada en la regulación del tráfico endocítico y el reciclaje de receptores, vinculando el transporte de membrana con la dinámica de señalización de los receptores de factores de crecimiento. Al modular la maduración y la clasificación de vesículas dependientes de Rab, RN-tre puede influir en el control espacial y temporal de vías como la señalización EGFR/MAPK y la remodelación del citoesqueleto, que gobiernan la migración y la invasión celular. Se ha informado de una expresión alterada de USP6NL en múltiples contextos tumorales y se estudia como un determinante de programas de tráfico de receptores que reconfiguran fenotipos proliferativos y de motilidad. Como regulador humano del tráfico, también es relevante para dilucidar cómo el transporte de membrana se entrecruza con la transducción de señales, el recambio de adhesiones y las respuestas al estrés celular.

RN-tre El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de USP6NL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RN-tre El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus USP6NL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional USP6NL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RN-tre. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo USP6NL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RN-tre en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RN-tre en células tumorales con expresión de USP6NL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.