Partículas Lentivirales de Activación (m) RIP3: sc-425224-LAC

El gen murino **Ripk3** codifica la quinasa de serina/treonina **RIP3**, un regulador central de la necrosis programada (necroptosis) aguas abajo de los receptores de muerte y de la detección inmunitaria innata. RIP3 actúa en el eje de señalización **RIPK1–RIPK3** para promover la fosforilación de **MLKL** y la alteración de la membrana, integrando señales procedentes de **TNF**, **TLR** y vías estimuladas por interferón. Mediante el diálogo cruzado con la apoptosis y la señalización inflamatoria, RIP3 influye en la producción de citocinas, las respuestas a lesión tisular y las interacciones huésped–patógeno. La actividad desregulada de RIP3 se ha implicado en modelos de patología inflamatoria y neurodegenerativa, daño isquémico y lesión tisular asociada a infecciones, lo que lo convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de muerte celular e inflamación.

Las partículas de activación lentiviral RIP3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ripk3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RIP3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ripk3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RIP3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ripk3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.