Plasmide CRISPR/Cas9 KO RIN3 (m): sc-432255

Présentation

Rin3 code pour RIN3, un interacteur de Ras et de Rab qui agit comme facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) pour les GTPases de la famille Rab5, reliant la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase au trafic endocytique. Dans les cellules de souris, RIN3 participe à l’endocytose médiée par la clathrine, à la maturation des endosomes précoces et à la régulation de l’internalisation et du recyclage des récepteurs, des processus qui modulent l’amplitude et la durée de la signalisation en aval. Par ces fonctions, Rin3 influence la dynamique des vésicules, le renouvellement membranaire et la coordination du cytosquelette lors des états d’activation cellulaire. Une activité altérée de RIN3 a été associée à des mécanismes liés aux maladies impliquant une dérégulation du trafic endosomal et de la signalisation des récepteurs, ce qui soutient son étude dans des voies contribuant à des phénotypes inflammatoires et neurodégénératifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RIN3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rin3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rin3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rin3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RIN3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rin3 pour l'étude de la signalisation de RIN3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rin3 essentiels à la fonction de RIN3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rin3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RIN3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RIN3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rin3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RIN3 plasmide HDR (m) et le RIN3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rin3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rin3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.