Ribosomal Protein LP0 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419183

Descripción general

Rplp0 codifica la proteína ribosomal LP0 (P0), un componente central de la subunidad ribosomal grande 60S que, junto con las proteínas P1/P2, forma el “tallo” ribosomal y favorece el reclutamiento de factores de traducción y la activación de GTPasas durante la elongación. Como proteína ribosomal conservada y constitutiva (housekeeping), LP0 es esencial para la biogénesis del ribosoma, la síntesis global de proteínas y los programas de crecimiento celular y de adaptación al estrés vinculados a la función nucleolar. La alteración de proteínas ribosomales puede desestabilizar el control de la traducción y la proteostasis, contribuyendo a fenotipos similares a ribosomopatías y a cambios en proliferación, apoptosis y diferenciación en contextos relevantes para la enfermedad. En sistemas de ratón, Rplp0 también se usa ampliamente como gen de referencia, por lo que su interrupción dirigida resulta útil para evaluar estrategias de normalización y fenotipos dependientes de la traducción.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein LP0 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rplp0 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rplp0 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rplp0 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ribosomal Protein LP0.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rplp0 para la investigación de la señalización de Ribosomal Protein LP0, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rplp0 críticos para la función de Ribosomal Protein LP0
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rplp0 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rplp0. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ribosomal Protein LP0 (m) y el plásmido HDR Ribosomal Protein LP0 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rplp0 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rplp0 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.