Ribosomal Protein L3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403160-ACT

RPL3 codifica a proteína ribossomal L3, um componente estrutural e funcional essencial da subunidade ribossomal grande 60S, que contribui para a biogênese do ribossomo e para a arquitetura do centro peptidil-transferase durante a tradução. Como parte do maquinário central de tradução, a RPL3 sustenta a síntese proteica global e está funcionalmente conectada a vias que regulam a função nucleolar, o controle do crescimento celular e a proteostase. Perturbações na homeostase de proteínas ribossomais podem acionar a sinalização de estresse ribossomal, incluindo respostas associadas ao p53, e se cruzar com a regulação do ciclo celular. A expressão desregulada de genes ribossomais, incluindo RPL3, tem sido observada em múltiplos contextos de doença e é frequentemente estudada como marcador e modulador de capacidade translacional alterada em estados proliferativos.

Ribosomal Protein L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein L3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein L3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein L3 em células tumorais com expressão de RPL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.