Ribosomal Protein L22L1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402323-LAC

RPL22L1 codifica per la proteina ribosomiale L22L1, un componente ribosomiale citoplasmatico che supporta la funzione della subunità grande 60S e contribuisce a una traduzione efficiente dell’mRNA. Nell’ambito dei processi fondamentali di biogenesi del ribosoma e di controllo della traduzione, RPL22L1 influenza la proteostasi e i programmi di crescita cellulare, sensibili a variazioni nella composizione ribosomiale. Alterazioni nel dosaggio delle proteine ribosomiali possono influire sulla regolazione del ciclo cellulare, sulle risposte allo stress e sull’espressione genica specifica di linea cellulare attraverso una traduzione modificata di mRNA strutturati o regolatori. Nella ricerca biomedica, RPL22L1 viene studiato nel contesto della specializzazione dei ribosomi e delle vie di sintesi proteica deregolate, spesso implicate in fenotipi oncogeni e dello sviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale Ribosomal Protein L22L1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RPL22L1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Ribosomal Protein L22L1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RPL22L1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Ribosomal Protein L22L1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RPL22L1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.