Ribosomal Protein L22L1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402323-ACT

RPL22L1 codifica a proteína ribossômica L22-like 1, um componente associado à subunidade maior 60S do ribossomo, que sustenta a biogênese ribossômica e a tradução eficiente de mRNA. Como parte da maquinaria central de tradução, RPL22L1 contribui para a proteostase e para programas relacionados ao crescimento que acoplam o sensoriamento de nutrientes, a progressão do ciclo celular e as respostas ao estresse por meio do controle traducional global e seletivo por transcritos. Variações na dosagem de proteínas ribossômicas podem influenciar a montagem do ribossomo e a tradução especializada, com efeitos a jusante em vias associadas à proliferação e à adaptação celular. A expressão desregulada de genes associados ao ribossomo, incluindo RPL22L1, é frequentemente investigada em contextos como crescimento oncogênico, alterações no metabolismo de RNA e fenótipos semelhantes a ribossomopatias.

Ribosomal Protein L22L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPL22L1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein L22L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPL22L1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPL22L1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein L22L1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPL22L1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein L22L1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein L22L1 em células tumorais com expressão de RPL22L1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.