Ribosomal Protein L10a Double Nickase Plasmid (h): sc-417441-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ribosomal Protein L10a Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ribosomal Protein L10a Double-Nickase-Plasmid (h) und Ribosomal Protein L10a Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RPL10A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ribosomal Protein L10a Double Nickase Plasmid (h) | sc-417441-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ribosomal Protein L10a Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417441-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RPL10A kodiert das ribosomale Protein L10a, eine Kernkomponente der großen ribosomalen 60S‑Unterheit, die die Ribosomenbiogenese und die Peptidelongation während der zytosolischen Translation unterstützt. Indem RPL10A zum Aufbau und zur Funktion der Translationsmaschinerie beiträgt, beeinflusst es die Proteostase und zelluläre Wachstumsprogramme, die mit Stressantwort-Signalwegen und der Zellzykluskontrolle verknüpft sind. Eine veränderte Dosierung oder Funktion ribosomaler Proteine kann die globale sowie die transkriptselektive Translation stören und verbindet so die Ribosomenbiologie mit Mechanismen, die Entwicklungsphänotypen und die tumorassoziierte translationale Umprogrammierung zugrunde liegen. RPL10A wird daher häufig im Zusammenhang mit Ribosomopathien, Linienfestlegung und translationsabhängiger Regulation der Genexpression untersucht.
Ribosomal Protein L10a Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RPL10A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RPL10A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RPL10A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RPL10A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.