RHOBTB3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406242

Descripción general

RHOBTB3 codifica una GTPasa atípica de la familia Rho con dominios BTB que actúa como adaptador, conectando el tráfico de membranas con la degradación de proteínas dependiente de ubiquitina. RHOBTB3 se ha implicado en la organización del Golgi y de los endosomas, el transporte vesicular y la regulación de la progresión del ciclo celular mediante interacciones con complejos de ligasa E3 de ubiquitina basados en Cullin3. Al influir en el tráfico intracelular y la proteostasis, RHOBTB3 puede modular las salidas de señalización que dependen del reciclaje de receptores y de la actividad compartimentalizada de pequeñas GTPasas. La desregulación de estos procesos se ha asociado con fenotipos alterados de proliferación y migración descritos en estudios relacionados con el cáncer, lo que respalda su relevancia para la oncología mecanística y la investigación en biología celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RHOBTB3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RHOBTB3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RHOBTB3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RHOBTB3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RHOBTB3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RHOBTB3 para la investigación de la señalización de RHOBTB3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RHOBTB3 críticos para la función de RHOBTB3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RHOBTB3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RHOBTB3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RHOBTB3 (h) y el plásmido HDR RHOBTB3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RHOBTB3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RHOBTB3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.