RHOBTB3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406242

Panoramica

RHOBTB3 codifica una GTPasi atipica della famiglia Rho con domini BTB che funge da adattatore, collegando il traffico di membrana al turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. RHOBTB3 è stata implicata nell’organizzazione del Golgi e degli endosomi, nel trasporto vescicolare e nella regolazione della progressione del ciclo cellulare attraverso interazioni con complessi ligasi E3 dell’ubiquitina basati su Cullin3. Influenzando il traffico intracellulare e la proteostasi, RHOBTB3 può modulare gli output di segnalazione che dipendono dal riciclo dei recettori e dall’attività compartimentalizzata di piccole GTPasi. La disregolazione di questi processi è stata associata a fenotipi alterati di proliferazione e migrazione riportati in studi legati al cancro, a supporto della sua rilevanza per la ricerca in oncologia meccanicistica e biologia cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RHOBTB3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RHOBTB3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RHOBTB3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RHOBTB3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RHOBTB3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RHOBTB3 per lo studio della segnalazione di RHOBTB3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RHOBTB3 critici per la funzione di RHOBTB3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RHOBTB3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RHOBTB3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RHOBTB3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RHOBTB3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RHOBTB3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RHOBTB3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.