RGS4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418013

Übersicht

RGS4 kodiert den „Regulator of G Protein Signaling 4“, ein GTPase-aktivierendes Protein, das die Beendigung von GPCR-vermittelter Signalübertragung beschleunigt, indem es die GTP-Hydrolyse der Gα-Untereinheit fördert. Durch die Begrenzung nachgeschalteter Second-Messenger-Signalwege wie cAMP/PKA- und PLCβ/Ca2+-Signalgebung prägt RGS4 die Rezeptordesensibilisierung, die neuronale Erregbarkeit und stimulusabhängige Transkriptionsantworten. Es wird in mehreren Geweben exprimiert, mit besonders wichtigen Funktionen im Nervensystem, und wurde mit der Modulation synaptischer Signalübertragung sowie neuroentwicklungsbezogener Prozesse in Verbindung gebracht. Veränderungen der RGS4-Expression und des Signalgleichgewichts wurden mit neuropsychiatrischen und kognitiven Phänotypen assoziiert, was RGS4 für mechanistische Studien zur Regulation von GPCR-Signalwegen relevant macht.

Das RGS4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RGS4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RGS4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RGS4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RGS4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RGS4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RGS4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RGS4-Exone abzielen, die für die RGS4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RGS4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RGS4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RGS4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RGS4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RGS4 HDR-Plasmid (h) und RGS4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RGS4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RGS4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.