Plásmido CRISPR de Activación (h) RFX1: sc-403144-ACT

RFX1 (factor regulador X1) es un factor de transcripción de unión al ADN que reconoce motivos X-box y modula la actividad del promotor en diversas redes génicas. En células humanas, RFX1 contribuye a la regulación de programas transcripcionales vinculados al control del ciclo celular, el estado de la cromatina y la expresión de genes relacionados con el sistema inmunitario, con efectos posteriores sobre la diferenciación y las respuestas celulares al estrés. La actividad alterada de RFX1 se ha investigado en el contexto del control transcripcional desregulado observado en la biología del cáncer y en procesos mediados por el sistema inmunitario, donde los cambios en la expresión pueden reconfigurar la salida de las vías. Debido a que se sitúa aguas arriba de múltiples cascadas reguladoras, RFX1 se utiliza con frecuencia como un nodo para estudiar la arquitectura de promotores, la ocupación de factores de transcripción y la plasticidad de las redes génicas.

RFX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RFX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RFX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RFX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RFX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RFX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RFX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RFX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RFX1 en células tumorales con expresión de RFX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.