Plasmide Double Nickase (m) Ret: sc-422654-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Ret correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ret Double Nickase (m) et le plasmide Ret Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ret. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ret Antibody (6E4C4): sc-101423
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Ret | sc-422654-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ret code une tyrosine kinase réceptrice qui sert de plateforme centrale de signalisation pour les ligands de la famille du GDNF via les co‑récepteurs GFRα, coordonnant chez la souris des programmes de développement neuronal et rénal. Une fois activé, RET mobilise les voies canoniques MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ afin de réguler la survie cellulaire, la différenciation, la migration et le guidage axonal. L’activité de Ret est essentielle dans les lignées dérivées de la crête neurale et la formation du système nerveux entérique, et sa dérégulation est associée à des anomalies du neurodéveloppement ainsi qu’à des contextes de signalisation oncogénique. En tant que nœud de voie, Ret est largement étudié pour analyser la signalisation des facteurs de croissance, la spécification des lignages et les réponses transcriptionnelles induites par les récepteurs.
Ret Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ret dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ret. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ret. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ret.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.