Plásmido Doble Nickase (h) REP-1: sc-404025-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)REP-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa REP-1 (h) y el plásmido de doble nickasa REP-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CHM. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: REP-1 Anticuerpo (2F1): sc-23905
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) REP-1 | sc-404025-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) REP-1 | sc-404025-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHM codifica la proteína escolta de Rab 1 (REP-1), una chaperona citosólica necesaria para la prenilación posraduccional de las GTPasas Rab por la geranilgeraniltransferasa de Rab. Al presentar las Rab recién sintetizadas para su geranilgeranilación, REP-1 favorece su direccionamiento a membranas y la función de etapas del tráfico reguladas por Rab, incluidas la endocitosis, el transporte del Golgi y las vías relacionadas con lisosomas. La alteración de la actividad de REP-1 desestabiliza el transporte vesicular y la homeostasis de los orgánulos, procesos especialmente críticos en células altamente polarizadas como el epitelio pigmentario de la retina y los fotorreceptores. Las variantes con pérdida de función en CHM se asocian a la coroideremia, lo que convierte a CHM en un locus clave para estudiar la biología de la prenilación de Rab y las respuestas de estrés celular dependientes del tráfico.
REP-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHM alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.