Rent1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402462-NIC

UPF1 (Rent1) codifica un’elicasi/ATPasi dell’RNA che svolge un ruolo centrale nella degradazione dell’mRNA mediata da nonsense (NMD), una via conservata di sorveglianza dell’RNA che rileva codoni di terminazione prematuri e promuove la degradazione di trascritti aberranti. Coordinandosi con i fattori di terminazione della traduzione e con componenti dell’NMD quali SMG1, SMG5/6/7, UPF2 e UPF3, UPF1 regola il controllo di qualità del trascrittoma, il turnover dell’mRNA e la proteostasi. L’attività di UPF1 interseca anche le risposte al danno del DNA, il mantenimento dei telomeri e la restrizione antivirale dell’RNA, collegando il metabolismo dell’RNA a vie più ampie di stress cellulare. La disregolazione dell’NMD e del processamento dell’RNA dipendente da UPF1 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo, alla biologia tumorale e a studi sulle infezioni virali, rendendo UPF1 un bersaglio ampiamente utilizzato per indagini meccanicistiche nelle cellule umane.

Rent1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UPF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UPF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UPF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UPF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.