Plásmido Doble Nickase (h) Rent1: sc-402462-NIC

UPF1 (Rent1) codifica una helicasa/ATPasa de ARN que es fundamental para la degradación de ARNm mediada por codones sin sentido (NMD), una vía conservada de vigilancia del ARN que detecta codones de terminación prematuros y favorece la degradación de transcritos aberrantes. Al coordinarse con factores de terminación de la traducción y con componentes de la NMD como SMG1, SMG5/6/7, UPF2 y UPF3, UPF1 regula el control de calidad del transcriptoma, el recambio del ARNm y la proteostasis. La actividad de UPF1 también se entrecruza con las respuestas al daño del ADN, el mantenimiento de los telómeros y la restricción antiviral del ARN, vinculando el metabolismo del ARN con vías celulares más amplias de respuesta al estrés. La desregulación de la NMD y del procesamiento de ARN dependiente de UPF1 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo, la biología tumoral y estudios de infección viral, lo que convierte a UPF1 en un objetivo ampliamente utilizado para investigaciones mecanísticas en células humanas.

Rent1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UPF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UPF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UPF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UPF1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.