RELA/NFκB p65 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400004-NIC

RELA codifica a subunidade p65 do NFκB, um fator de transcrição central que forma heterodímeros (comumente com NFKB1/p50) para regular programas gênicos induzíveis que controlam inflamação, respostas imunes inata e adaptativa, sobrevivência celular e sinalização de estresse. Na via canônica de sinalização do NFκB, estímulos a montante como TNF, IL-1 e a ativação de receptores de reconhecimento de padrões convergem para a fosforilação e degradação de IκB mediadas por IKK, permitindo a translocação nuclear de p65 e a ativação transcricional. A atividade de RELA é ainda modulada por modificações pós-traducionais e por “cross-talk” com as vias MAPK, JAK/STAT e interferon, influenciando a produção de citocinas, a resistência à apoptose e a diferenciação celular. A desregulação da sinalização NFκB/RELA é frequentemente implicada em estados inflamatórios crônicos e em processos oncogênicos, incluindo alterações na sinalização do microambiente tumoral e o acionamento de vias de sobrevivência.

RELA/NFκB p65 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RELA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RELA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RELA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RELA interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.