RELA/NFκB p65 Double Nickase Plasmid (h): sc-400004-NIC

RELA kodiert die NFκB‑Untereinheit p65, einen zentralen Transkriptionsfaktor, der Heterodimere (häufig mit NFKB1/p50) bildet, um induzierbare Genprogramme zu regulieren, die Entzündungen, angeborene und adaptive Immunantworten, Zellüberleben und Stresssignalwege steuern. In der kanonischen NFκB‑Signalübertragung laufen upstream‑Signale wie TNF, IL‑1 und die Aktivierung von Mustererkennungsrezeptoren auf die IKK‑vermittelte Phosphorylierung und den Abbau von IκB zusammen, wodurch p65 in den Zellkern transloziert und die Transkription aktiviert. Die RELA‑Aktivität wird zusätzlich durch posttranslationale Modifikationen und Crosstalk mit MAPK‑, JAK/STAT‑ und Interferon‑Signalwegen geprägt und beeinflusst dadurch Zytokinproduktion, Apoptoseresistenz und zelluläre Differenzierung. Eine Fehlregulation der NFκB/RELA‑Signalgebung ist häufig an chronischen Entzündungszuständen und onkogenen Prozessen beteiligt, einschließlich veränderter Signale im Tumormikromilieu und der Aktivierung von Überlebenswegen.

RELA/NFκB p65 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RELA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RELA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RELA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RELA-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.