REDD-1 Double Nickase Plasmid (r): sc-437314-NIC
- Zielspezies: rat
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das REDD-1 Double Nickase Plasmid (r) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- REDD-1 Double-Nickase-Plasmid (r) und REDD-1 Double-Nickase-Plasmid (r2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
REDD-1 Double Nickase Plasmid (r) | sc-437314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
REDD-1 Double Nickase Plasmid (r2) | sc-437314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
REDD-1 (auch als DDIT4 bekannt) ist ein stressinduzierbarer Regulator, der Hypoxie, DNA-Schäden, oxidativen Stress und Nährstoffmangel über die TSC1/2–Rheb-Achse mit der Hemmung der mTORC1-Signalübertragung verknüpft. In Rattenzellen hilft REDD-1, die metabolische Anpassung zu koordinieren, indem es Proteinsynthese und Zellwachstum begrenzt und zugleich Autophagie, mitochondriale Funktion und die Redox-Homöostase beeinflusst. Eine veränderte REDD-1-Expression wurde mit einer fehlregulierten mTOR-Aktivität und Stressresistenz-Phänotypen in Verbindung gebracht, die für metabolische Dysfunktion, Modelle ischämiebedingter Schädigung und entzündungsassoziiertes Gewebe-Remodelling relevant sind. Da REDD-1 an einem Konvergenzpunkt der HIF-1-, AMPK- und mTOR-Signalwege liegt, wird es häufig genutzt, um Stressantwort-Schaltkreise sowie nachgeschaltete transkriptionelle und proteostatische Programme zu untersuchen.
REDD-1 Das Double-Nickase-Plasmid (r) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des -Lokus in rat-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die -Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit -Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.