Plásmido Doble Nickase (m) RBP-Jκ: sc-422626-NIC

Rbpj codifica RBP-Jκ, un factor de transcripción de unión al ADN específico de secuencia que actúa como el efector nuclear central de la señalización canónica de Notch. Tras la activación del receptor Notch, RBP-Jκ pasa de ser un represor transcripcional a un activador mediante el reclutamiento de NICD y coactivadores, regulando genes que controlan decisiones de destino celular, proliferación y diferenciación. En sistemas murinos, los programas dependientes de RBP-Jκ son fundamentales en la hematopoyesis, la neurogénesis y el desarrollo de células inmunitarias, y la desregulación de las salidas transcripcionales Notch–RBP-Jκ se utiliza con frecuencia como marco mecanístico para estudiar la transformación oncogénica y fenotipos del desarrollo. Como nodo que integra señales de Notch con el control de la cromatina y de la transcripción, Rbpj se investiga ampliamente en vías que regulan el mantenimiento de células madre/progenitoras y el compromiso de linaje.

RBP-Jκ El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Rbpj en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Rbpj. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Rbpj. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Rbpj alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.