RBM15 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417289-ACT

RBM15 (RNA-Bindungsmotiv-Protein 15) ist ein nukleärer RNA-bindender Faktor, der die Genexpression durch die Kontrolle der prä-mRNA-Prozessierung und des mRNA-Stoffwechsels reguliert. Es ist an Programmen der hämatopoetischen Differenzierung beteiligt und wirkt in transkriptionellen und posttranskriptionellen Netzwerken mit, einschließlich Wechselwirkungen mit der epitranskriptomischen Maschinerie, die Entscheidungen über das Schicksal von RNA beeinflusst. Eine dysregulierte RBM15-Aktivität wurde mit veränderter Linienfestlegung und Proliferationsphänotypen in Verbindung gebracht, und RBM15-Genumlagerungen wurden im Kontext hämatologischer Malignome beschrieben, was seine Relevanz für die Untersuchung onkogener transkriptioneller Schaltkreise und RNA-regulatorischer Signalwege unterstreicht.

RBM15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RBM15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RBM15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RBM15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RBM15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RBM15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RBM15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RBM15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RBM15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RBM15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.