Plasmide Double Nickase (h) RBCK1: sc-402044-NIC

RBCK1 (également connu sous le nom de HOIL-1) code une ligase E3 de l’ubiquitine qui agit comme un composant central du complexe d’assemblage des chaînes d’ubiquitine linéaires (LUBAC), en coordonnant des événements d’ubiquitination liés à Met1 qui façonnent la signalisation immunitaire innée et adaptative. En régulant l’activation de NF-κB et les réponses des voies inflammatoires en aval de récepteurs tels que TNFR et de certains récepteurs de reconnaissance de motifs (PRR), RBCK1 influence la production de cytokines, la survie cellulaire et les réponses au stress. RBCK1 participe également à la protéostasie et aux voies de contrôle qualité via des réseaux de signalisation de l’ubiquitine. La dérégulation de l’activité de RBCK1/LUBAC a été associée à des phénotypes immunitaires et auto-inflammatoires et a été étudiée dans des contextes incluant l’immunodéficience et l’inflammation tissulaire.

RBCK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RBCK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RBCK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RBCK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RBCK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.