RASAL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422603

Übersicht

Rasal1 kodiert RASAL1, ein Ras‑GTPase‑aktivierendes Protein, das die Umwandlung des aktiven Ras‑GTP in das inaktive Ras‑GDP beschleunigt und damit Ras‑getriebene Signalübertragung begrenzt. Durch die Modulation nachgeschalteter Aktivitäten der RAF–MEK–ERK‑ und PI3K–AKT‑Signalwege beeinflusst RASAL1 Programme der Zellproliferation, des Überlebens und der Differenzierung, einschließlich kontextabhängiger Effekte auf epitheliale und mesenchymale Phänotypen. Eine veränderte Funktion oder Expression von RASAL1 wurde in mehreren Geweben mit einer dysregulierten Wachstumskontrolle und fibrotischem Remodeling in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zur Signalhomöostase und krankheitsassoziierter zellulärer Reprogrammierung in Mausmodellen unterstreicht. Diese Eigenschaften machen Rasal1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Rückkopplungen im Ras‑Signalweg sowie dessen Cross‑Talk mit transkriptionellen und extrazellulären Matrix‑Regulationsnetzwerken zu untersuchen.

Das RASAL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rasal1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rasal1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rasal1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RASAL1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rasal1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RASAL1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rasal1-Exone abzielen, die für die RASAL1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rasal1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RASAL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RASAL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rasal1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RASAL1 HDR-Plasmid (m) und RASAL1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rasal1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rasal1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.