Plasmide CRISPR/Cas9 KO RASAL1 (m): sc-422603

Présentation

Rasal1 code RASAL1, une protéine activatrice de la GTPase Ras (Ras GTPase-activating protein, GAP) qui accélère la conversion de Ras-GTP actif en Ras-GDP inactif, limitant ainsi la signalisation dépendante de Ras. En modulant l’activité des voies en aval RAF–MEK–ERK et PI3K–AKT, RASAL1 influence les programmes de prolifération, de survie et de différenciation cellulaires, avec notamment des effets dépendant du contexte sur les phénotypes épithéliaux et mésenchymateux. Une altération de la fonction ou de l’expression de RASAL1 a été associée à une dérégulation du contrôle de la croissance et à un remodelage fibrotique dans de multiples tissus, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de l’homéostasie de la signalisation et de la reprogrammation cellulaire associée aux maladies dans des modèles murins. Ces propriétés font de Rasal1 un nœud utile pour disséquer les rétrocontrôles de la voie Ras et ses interactions avec les réseaux régulateurs transcriptionnels et de la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RASAL1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rasal1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rasal1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rasal1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RASAL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rasal1 pour l'étude de la signalisation de RASAL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rasal1 essentiels à la fonction de RASAL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rasal1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RASAL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RASAL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rasal1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RASAL1 plasmide HDR (m) et le RASAL1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rasal1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rasal1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.